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真空冷凍干燥技術在培養基凍干中的應用

 更新時間:2024-08-21 點擊量:460

細胞培養技術對人類社會的影響是不可估量的。近年來生物學的進步在很大程度上依賴于細胞培養技術。此外,基于細胞培養的實用技術在各個領域得到了發展,包括新藥的療效和毒性評估、疫苗和生物制藥的制造以及輔助生殖技術。隨著體細胞重編程最近在技術上變得可行,世界各地的研究人員正在激烈競爭再生醫學發展的地位。同樣,在這一領域,細胞培養技術也被視為進一步發展和普及的基礎。

細胞培養技術中最重要的因素是培養基,如最小基本培養基(MEM)、Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)、DMEM-f-12培養基和RPMI培養基,這些培養基不僅對細胞代謝、氧化還原狀態和一些信號轉導通路有著深遠影響,對細胞形態和分化也有著極大影響。培養基維持細胞存活和增殖,以及細胞功能,這意味著培養基的質量直接影響研究結果、生物制藥生產率和輔助生殖技術的治療結果。因此,對于從事細胞培養工作的研究人員來說,選擇適合其目標的合適培養基至關重要。在某些情況下,研究人員應該自己調整培養基的成分。此外,當遇到問題時,研究人員必須了解介質的特性,以便確定實驗出現問題的原因。

在研發這些培養基時,其主要目的是確保以低成本實現高細胞增殖率和生物量生長,并避免頻繁補充營養物質。目前,根據添加的補充劑類型,合成培養基可分為幾種,例如,含血清培養基、無血清培養基、無蛋白培養基和化學成分明確的培養基。含血清的培養基含有各種血清衍生物質,這使得培養基成分不明確,其濃度可能因批次而異。這種情況使培養結果的可重復性降低,并存在微生物污染的風險。然而,含血清的培養基可以很容易地配制出來,并有效地用于各種細胞類型,因為血清含有大量的活性物質,這些活性物質是動物細胞存活和生長所必需的。相比之下,無血清培養基具有確定的成分,從而實現結果的高可重復性,并且培養過程可以得到驗證。此外,如果培養條件配置為有益于靶細胞,則可以在混合細胞群中選擇性地生長靶細胞。在無血清培養基中,無蛋白培養基(不含任何蛋白質)和化學成分明確的培養基(不含任何未定義成分)的亞組為培養系統提供了額外的穩定性和可重復性,有助于識別細胞分泌物并降低微生物污染的風險。然而,無血清培養基很難設計:迄今為止,只有特定的細胞類型以這種方式培養。

目前,用于細胞培養的常用培養基配方已上市。因此,有些研究人員在使用培養基時一般不會了解其詳細信息和背景,特別是關于其開發的基本原理、確切成分以及這些培養基適合的細胞類型。


每種基礎培養基都是根據細胞類型、來源(動物種類)和培養目的在每種情況下設計的。事實上,培養基成分可能會有很大差異。例如,MEM(由Eagle開發)是在有血清補充劑的假設下設計的,因此僅包含限度的必要成分(無機鹽、糖、必需氨基酸和水溶性維生素)。相比之下,用于無血清培養的培養基199和Ham's F-12含有各種其他成分。研究人員可以在實驗比較后選擇幾種培養基。MEM、DMEM或Ham的F-12通常用于貼壁細胞培養;懸浮細胞一般選擇RPMI 1640培養基;用于無血清培養的混合培養基,如DMEM/F-12。


建立無血清培養,使用無血清培養系統時,有兩點需要注意。首先,在傳代培養過程中,可以在培養容器中選擇非預期的細胞克隆,因為無血清培養基比含血清培養基更能促進特定細胞克隆或細胞亞型的增殖。其次,無血清培養基中的雜質,無論是可避免的還是不可避免的,可能比含血清培養基對培養細胞的影響更大。此外,無血清培養還有其他注意事項,即盡量減少胰蛋白酶的濃度和粘附因子。


4-(2-羥1乙1基)-1-哌1嗪乙磺酸(HEPES)具有很強的緩沖能力,在培養基中可能具有緩沖作用。特別是當培養的細胞在二氧化碳培養箱外處理時,使用HEPES的培養基的pH值比僅使用碳酸氫鹽的培養基更穩定。它也可能對高細胞密度的培養有益,例如,當pH值由于代謝物(如乳酸)的積累而迅速下降時。對于缺乏血清緩沖能力的無血清培養基,HEPES的pH緩沖作用可能更為重要。然而,HEPES可能對某些類型的細胞產生負面影響,例如雞胚骨骺軟骨細胞和小鼠胚胎干細胞(ES 細胞)。研究還表明,在培養基暴露于可見光期間,含有HEPES的培養基會產生更高水平的細胞毒性產物,主要是過氧化氫。

酚紅作為pH指示劑添加到培養基中,有時會影響細胞的增殖并顯示出雌激素活性。因此,測試酚紅的這些特性是否會影響他們的細胞和經驗結果,尤其是當涉及雌激素敏感細胞(如乳腺細胞)時。


介質的污染,不明來源的異物可能會污染培養基,從而可能影響實證結果。通常,這些污染物包括病毒、細菌、支原體和內毒素。然而,還有其他類型的污染物,如增塑劑,可能會從塑料器械中洗脫出來,這些物質也會影響培養物中的細胞。因此,研究人員可以考慮嚴格采用無菌技術,并謹慎選擇培養器械。在某些特殊情況下,建議在使用前立即用培養基清洗儀器。


培養基凍干粉應用在制備皮膚修復、抗皮膚衰老、修復皮膚氧化應激損傷和修復皮膚紫外線損傷的產品中,產品包括藥物、護膚品或化妝品。通過添加凍干保護劑將含有大量干細胞分泌物質的條件培養基冷凍干燥成固體粉末,穩定細胞因子性質,使其能發揮最大的功效,特別是添加海藻糖除了能夠作為凍干保護劑,保護條件培養基中細胞因子的活性,同時海藻糖本身具有抗氧化作用,延緩細胞衰老。

傳統用于外周血淋巴細胞染色體制備采用的培養基一般為在液體狀態的基礎培養基(如RPMI1640)的基礎上添加一定量血清和植物血球凝集素(PHA)而成。利用PHA對處于Gtl期的淋巴細胞的刺激作用,使之進入分裂周期,從而能進行染色體核型分析。但液體狀態的淋巴細胞培養基不利于室溫下存放,其包含的活性物質如谷氨酰胺、PHA等易失活。即使在2-8℃低溫存放一段時間后培養基,培養的淋巴細胞中可進行核型分析的處于分裂相數目顯著下降。利用凍干技術制備培養基凍干粉是解決上述問題的方法。但到目前為止,并沒有發現太多提供具體的培養基凍干工藝或方法的公開報道。



富睿捷培養基凍干

實驗樣本:培養基

實驗目的:去除所有水分,凍干成粉末

實驗設備:真空冷凍干燥機Venues2501


真空冷凍干燥技術在培養基凍干中的應用

實驗過程:

1.打開凍干機預冷。

2.將樣品分裝到合適的容器內預凍。

3.將預凍好的樣品放入透明倉內,啟動凍干機。

4.凍干結束后,釋壓取出凍干好的樣品,儲存或者進行后續實驗。

實驗結果:凍干前后對比圖

真空冷凍干燥技術在培養基凍干中的應用